Capítulo 11: Aperfeiçoamento e Dificuldades da Teoria Microbiana

 Primeiro, que o parasita é encontrado em cada caso da doença em questão, e sob condições correspondentes às  mudanças patológicas e ao caminho clínico da enfermidade;
 Segundo, que não ocorre em outra doença como um parasita acidental e não patogênico;
 Terceiro, que quando isolado do corpo e propagado através de um número suficiente de culturas puras, pode produzir novamente a enfermidade,
 então, nessas circunstâncias, o micróbio não pode ser um acompanhante acidental da doença, e não se pode conceber que o parasita tenha outra relação com a doença, exceto ser sua causa.

         O antraz foi a primeira doença para a qual Koch foi capaz de desenvolver a cadeia completa de prova. Havia muitas dificuldades nesse tipo de trabalho. A primeira era a investigação cuidadosa dos próprios microorganismos, de tal modo a poder identificá-los e diferenciá-los claramente uns dos outros. Isso só foi possível com o avanço da microscopia, com melhores lentes, e com o uso de corantes de diferentes tipos, que permitem observar a estrutura de cada organismo. Assim, várias bactérias que pareciam iguais foram distinguidas. O próprio Koch deu grande contribuição às técnicas microbiológicas de observação. Ele desenvolveu novos processos de iluminação dos microscópios; introduziu a coloração de bactérias por anilinas; desenvolveu um método de fotografia microscópica e o exame com lente de imersão. É claro que outras pessoas, ao mesmo tempo, deram importantes contribuições, mas Koch ajudou muito no desenvolvimento de técnicas adequadas para observação, descrição e registro dos microorganismos.

         Por outro lado, era necessário separar e cultivar os diferentes tipos de microorganismos. O desenvolvimento de culturas puras (sem misturas) era muito difícil. Era preciso fazer muitas tentativas até descobrir o meio (sólido ou líquido) no qual cada tipo de microorganismo se desenvolvia e reproduzia. Koch testava todo tipo de substâncias que conseguia imaginar para o cultivo das bactérias: rodelas de batata, o líquido do interior do olho de um boi, ágar, etc. Descobriu que, utilizando um meio de cultura sólido, formavam-se pequenas colônias separadas, sem mistura, conseguindo então isolar as bactérias que estava estudando.